Jackson ImmunoResearch 蛋白质印迹指南丨膜清洗

Jackson公司蛋白质印迹指南丨膜清洗前言：

洗涤去除印迹上存在的未结合或聚集的蛋白质以及可能干扰靶分子检测并有助于降低背景信号的未结合试剂。可以通过提高信噪比来提高检测灵敏度，从而更准确地分析目标蛋白质。我们的蛋白质印迹指南的第 7 部分详细介绍了蛋白质印迹的洗涤步骤的实践。

Jackson公司蛋白质印迹指南丨膜清洗概述：

·洗涤步骤程序

·选择合适的洗涤缓冲液

·参考

一、洗涤步骤程序 

1.洗涤通常在室温下进行。

2.通过将膜置于完全浸没膜的一定体积的洗涤缓冲液中来洗涤印迹。例如，平均 10 cm² 的印迹需要 >40 ml 的洗涤缓冲液，我们通常使用 100 ml。

3.将膜在洗涤缓冲液中孵育 5-10 分钟，并使用摇杆或平台摇床或合适的印迹处理器不断搅拌。

4.然后在每次试剂孵育之间重复洗涤过程。

二、选择合适的洗涤缓冲液

1.磷酸盐缓冲液 (PBS)

PBS 溶液的配方可能有所不同，但通过结合磷酸钠和氯化钠将溶液缓冲至 7.5 的 pH 值，可以接近生理条件。如果目标蛋白被磷酸化，或者要使用碱性磷酸酶 (AP) 偶联物，则应避免使用 PBS，因为磷酸盐会与磷酸化蛋白相互作用或淬灭 AP 活性，从而影响结果的可靠性。

2.Tris 缓冲盐水 (TBS)

TBS 有时用作洗涤缓冲液以替代 PBS。它通常通过将 Tris Base 与 Tris HCL 和氯化钠混合制成生理 pH 值约为 7.2 的溶液。

3.洗涤剂

加入去污剂如 Triton X-100、SDS 或 Tween-20™ 以防止未结合的蛋白质聚集。粘性复合物可以形成并与膜结合，造成背景 Tween-20™ 通常以溶液的 0.05% 至 0.1% v/v 使用。

高于 0.1% 的浓度会从膜上剥离靶蛋白以及与其结合的抗体，从而降低印迹的信号和准确性。

注意1：微生物生长会产生背景信号

洗涤缓冲液应在使用前新鲜配制。

注意2：洗涤缓冲液中的封闭试剂

有时将封闭试剂添加到洗涤缓冲液中。我们建议仅使用缓冲溶液，不添加封闭蛋白，如奶粉或 BSA。

三、Jackson ImmunoResearch 蛋白质印迹指南丨膜清洗部分文献参考：

Blancher C. et al. (2001). SDS-PAGE and Western Blotting Techniques. Methods in Molecular Medicine. DOI: 10.1385/1-59259-136-1:145.

Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. (2017). Western Blotting Troubleshooting Guide! https://www.jacksonimmuno.com/secondary-antibody-resource/technical-tips/western-blot-trouble-shooting/

GE Healthcare. (2011). Western Blotting Principles and Methods.