Kamiya丨Kamiya艾美捷小鼠血红蛋白ELISA说明书

Kamiya艾美捷小鼠血红蛋白ELISA预期用途：

小鼠血红蛋白ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫分析（ELISA）小鼠生物样品中血红蛋白的测定。仅供研究使用。

引言

血红蛋白（HM）是红细胞中的含铁氧转运蛋白。它吸收肺部的氧气将其递送至组织以维持细胞的活力。血红蛋白的每个亚基都是一个球状蛋白质嵌入血红素组。每个血红素基团含有一个铁原子并负责氧的结合。减少血红蛋白导致贫血症状。

Kamiya艾美捷小鼠血红蛋白ELISA试验原理：

在该测定中，血红蛋白存在于样品与吸附在聚苯乙烯微量滴定表面的抗血红蛋白抗体反应

井。通过洗涤除去未结合的蛋白质后，与辣根过氧化物酶缀合的抗HM抗体（HRP）被添加。该HRP缀合的抗体与先前结合的血红蛋白形成复合物。以下另一个洗涤步骤，通过添加显色底物来测定与免疫吸附剂结合的酶，3,3'，5,5'- TMB。结合酶的数量与血红蛋白浓度成正比测试样品；因此，450nm处的吸光度是测试样品中血红蛋白浓度的量度。测试样品中血红蛋白的量可以从由校准品，并针对样品稀释进行校正。

Kamiya艾美捷小鼠血红蛋白ELISA试验试剂制备：

1.稀释剂浓缩物

提供的稀释剂溶液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水1:5稀释。

2.洗涤液浓缩物

提供的洗涤溶液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水按1:20稀释。水晶当储存温度低时，浓缩物中的形成并不少见。将浓缩物升温至稀释前30-35°C可溶解晶体。

3.酶-抗体缀合物浓缩物

通过添加10μL计算每个微量滴定板测试条所需的工作共轭溶液量对于用于测试的每个测试条，酶-抗体与990μL1X稀释剂缀合。均匀，但轻轻混合。避免起泡。使用前立即稀释并避光。

4.TMB底物溶液

随时可用。

5.微量滴定板

随时可用。密封微量滴定袋并从袋中取出板。去除所有会不用于测定并放回袋中并与干燥剂一起重新密封。

6.小鼠血红蛋白校准器

向冻干的小鼠血红蛋白校准器中加入1.0 mL蒸馏水或去离子水，轻轻混合直至溶解。校准器现在的浓度为3.40μg/mL（重组校准器应等分如果打算将来使用，则冻结）。小鼠血红蛋白校准器需要在使用前立即准备好在每个步骤之间混合均匀。避免起泡。

测定方案：

稀释样品

用于定量样品中血红蛋白的测定需要在使用前稀释每个测试样品。稀释1： 4000适用于大多数血清/血浆样品。对于绝对量化，样本产生的结果以外校准曲线的范围，可能需要较小或较大的稀释度。如果不确定样品水平，则进行连续稀释强烈建议在运行整个盘子之前使用一个或两个代表性样品。

要制备1:4000稀释的样品，将5μL样品转移至495μL1X稀释剂中。这给你一个1:100稀释。

接下来，通过将10μL转移至390μL1X稀释剂稀释1:100样品。你现在有一个1:4000稀释你的样品。在每个阶段彻底混合。